BalbHyb快速杂交液是一种用于Northern、Southern实验中RNA或DNA与RNA、DNA或Oligonucleotide探针快速高效杂交的溶液。本制品为DNase/RNase/Protease-free的无菌产品,可以和Biotin Northern Blot Kit (R0219)以及Biotin Northern Blot Kit (for Small RNA) (R0220)配合使用。
本制品为Northern检测提供了非常关键的快速高灵敏度的杂交液,给Northern杂交检测提供了极大的便利。本制品经DEPC处理并高温高压灭菌处理,确保无DNase、RNase和Protease,即无DNA酶、RNA酶和蛋白酶。
本制品为高灵敏度快速杂交液,含有独特的杂交加速试剂,可以大大提高杂交速度和检测灵敏度,通常杂交2h即可达到杂交过夜的效果。本制品用于Northern检测小鼠肝脏总RNA中tRNA-Ala的效果参考图1,仅1ng的总RNA样品通过2h的杂交就可以获得和杂交过夜基本一致的良好检测信号。
图1.使用百奥莱博的BalbHyb快速杂交液进行Northern检测时,分别杂交2h和杂交过夜的检测效果图。实验样品为小鼠肝脏组织中提取的总RNA,使用3’端生物素标记的Oligo探针检测。检测mouse-tRNA-Ala-TGC-3-1的探针为5’-TGGAGATGCCGGGGATCGAACC-Biotin-3’。实际检测效果会因为实验条件的不同而有所不同,图中效果仅供参考。
Northern检测方法在1977年由斯坦福大学James Alwine、David Kemp和George Stark发明,可用于检测RNA的大小、丰度和电泳时的迁移位置等。由于DNA Blot以其发明人Edwin Southern的名字命名为“Southern Blot”,与其类似的RNA Blot因此被命名为“Northern Blot”。Northern Blot包括以下主要步骤:RNA样品的分离与纯化,RNA样品的变性或非变性凝胶电泳,将凝胶中的RNA样品转印至尼龙膜或硝酸纤维素膜上,预杂交,与带有标记的特异核酸探针(DNA或RNA探针)杂交,最后经放射自显影、化学发光或显色的方法进行探针的检测。其中基于化学发光的Northern检测,灵敏度非常高,又无需接触对于人体有伤害的放射性同位素,目前被广泛使用。
Northern检测用于定性和定量检测目的RNA时,比qPCR或高通量测序要繁琐很多。Northern相对于qPCR和高通量测序,最大的优势是可以通过印迹检测确定目的RNA的长度或者说是电泳时的迁移位置,并且不受小RNA末端修饰的影响。qPCR很难确定目的RNA的长度,高通量测序会受读长影响,以及RNA末端修饰的影响。
组分 | 100mL | 500mL |
BalbHyb快速杂交液 | 100mL | 500mL |
说明书 | 1份 | 1份 |
保存:室温,有效期1年。
- BalbHyb快速杂交液在较低温度下容易有沉淀析出。如有沉淀出现,可在40~50℃水浴孵育,并在充分溶解后使用。
- 由于环境中存在较多的RNase,使用过程中容易出现RNase污染而影响本制品的后续使用。操作过程中须严格注意避免RNase污染。宜戴口罩吸取本制品,并尽量减少本制品暴露于空气中的时间,取用后宜立即盖上盖子。
- BalbHyb快速杂交液可用于尼龙膜上RNA或DNA样品与DNA、RNA或Oligonucleotide探针的杂交,也可以用于杂交前的预杂交。通常每100cm2尼龙膜进行预杂交和杂交时,需要使用10mL BalbHyb Quick Hybridization Solution。
- 关于Northern检测的详细实验步骤,请参考百奥莱博的Northern检测试剂盒(生物素标记探针,货号:YTB4661)或Northern检测试剂盒(生物素标记探针,小RNA,货号:YTB4662)。
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